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  • 雙向螢光差異凝膠電泳

    DIGE — 雙向螢光差異凝膠電泳(Two-dimensional fluorescence difference gel electrophoresis,2D-DIGE),是在傳統雙向電泳的基礎上發展而來的新型蛋白質組學定量技術,其分離蛋白質混合的原理與雙向電泳是一致的,主要利用蛋白質的等電點和分子量的差異來分離蛋白質混合物,同時應用螢光染料的靈敏度及內標的使用等技術,使其在定量蛋白質組學的研究中效果明顯優於傳統雙向電泳。

    DIGE使用的螢光染料有Cy2, Cy3和Cy5,它們能與蛋白質的賴氨酸側鏈氨基反應而使蛋白質被標記,被標記蛋白質的等電點和分子量幾乎不受影響,等量混合標記好的蛋白質後進行雙向電泳,不同凝膠之間可以通過cy2內標匹配,消除凝膠之間的差異,蛋白質表達量的變化則通過cy3和cy5不同螢光的強度來體現。

    與常規雙向電泳後,銀染或考染膠相比,DIGE具有以下優勢:
    1、靈敏度高,蕞低可檢測到125pg的蛋白質;
    2、高效性,同一塊凝膠上可以電泳兩個樣品,減輕了工作量;
    3、線性範圍更廣,動態範圍高達10-5;
    4、定量精確, 採用內標消除了凝膠與凝膠之間的實驗誤差,顯著提高了實驗的精確度和可重複性;
    5、統計學分析,ImageMaster7.0(DIGE)軟體可以得到統計學可信的結果,降低了操作者之間的偏差。