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  • EMSA實驗

    凝膠遷移或電泳遷移率檢測是一種檢測蛋白質和DNA序列相結合的技術,最初用於研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用,可用於定性和定量分析。分為2種類型:同位素標記探針,非同位素標記探針。

    通常將純化的蛋白和細胞粗提液和32P同位素標記的DNA或RNA探針一同保溫,在非變性的聚丙烯凝膠電泳上,分離複合物和非結合的探針。DNA-複合物或RNA-複合物比非結合的探針移動得慢。同位素標記的探針依研究的結合蛋白的不同,可是雙鏈或者是單鏈。當檢測如轉錄調控因數一類的DNA結合蛋白,可用純化蛋白,部分純化蛋白,或核細胞抽提液。在檢測RNA結合蛋白時,依據目的RNA結合蛋白的位置,可用純化或部分純化的蛋白,也可用核或胞質細胞抽提液。競爭實驗中採用含蛋白結合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段(特異),和其它非相關的片段(非特異),來確定DNA或RNA結合蛋白的特異性。在競爭的特異和非特異片段的存在下,依據複合物的特點和強度來確定特異結合。